心肌梗死模型

心肌梗死(myocardial infarction，MI)是一种严重的心血管疾病，由于冠状动脉血供急剧减少或中断，使心肌持续性缺血缺氧以致坏死，损害心功能且可能导致心律失常、休克以及心力衰竭等严重后果。

目前建立心肌梗死动物模型的方法有多种，包括：冠脉结扎法、药物法、栓塞法、左室电灼法、液氮冷冻法等^[1,2]。其中药物法主要通过舌下静脉注射垂体后叶素诱发血管痉挛促使心肌缺血梗死；后三种方法可直接形成冠脉闭塞，但对辅助设备要求高，操作难度大；冠状动脉结扎法操作成熟简便，梗阻部位明确易于判断，既符合心梗发生的实际病理过程，又便于开展实验研究，故主要采用此法建立心梗模型^[3,4]。

1 MI模型制备

1.1实验动物

依实验目的不同可选用SPF级C57BL/6J雄性小鼠或雄性SD大鼠。

1.2麻醉与术前准备

实验鼠适应性饲养1周。术前禁食12 h。将实验鼠放进连接好的麻醉机诱导箱，调整异氟烷浓度至5%，完成诱导麻醉后将实验鼠固定在手术板上，调整异氟烷浓度至2%，连接面罩并持续吸入。

1.3手术操作

实验鼠仰卧位固定，左前胸手术区域常规备皮消毒。触及实验鼠心尖搏动最明显的肋间，距胸骨左缘约1.5~2 cm皮肤(大鼠)，1cm(小鼠)处做长约1cm斜切口，逐层钝性分离胸壁肌肉，从第3或第4肋间隙快速打开胸腔，用止血钳撑开肋间隙，轻轻挤压使心脏从孔隙中弹出。在左心耳下缘与肺动脉圆锥交界处找到冠状动脉前降支，距其根部1-2mm处用7-0线穿过并结扎，结扎后出现心肌搏动减弱，心肌组织变苍白。结扎操作时间≤10 s，结扎完成后轻柔地将心脏送回胸腔，快速挤压胸腔排出空气，逐层关闭胸腔，开胸操作时间≤30 s，4-0线缝合皮肤，完成手术。术中逐步调整异氟烷浓度至0，脱离面罩后将实验鼠置于恒温垫上约3~5 min即可苏醒。术后连续3天肌肉注射青霉素杀菌抗感染。

2模型评价

心梗模型的评价根据实验目的及实验动物的存活状态分为活检和尸检。

2.1活检—影像学检测法

(1)肢体导联心电图

心梗术后即刻与术后4h，实验鼠以异氟烷吸入麻醉后仰卧位固定，连接心脏导联线，并将针电极分别固定在右上肢、左上肢，右下肢接地，避免周围磁场干扰。待基线平稳后，记录4-5个心动周期。心电图ST段弓背向上抬高并持续15 min以上作为评判心肌梗死造模成功的标志。

正常心电图

心梗模型心电图

(2)超声心动图^[5]

实验鼠以异氟烷吸入麻醉后仰卧位固定，M型超声模式下记录实验鼠心脏舒张期室间隔厚度(IVS:d)、舒张期左室内径(LVID:d)、舒张期左室后壁厚度(LVPW:d)、收缩期室间隔厚度(IVS:s)、收缩期左室内径(LVID:s)、收缩期左后室壁厚度(LVPW:s)及射血分数(EF%)值。

2.2尸检—染色法

(1)伊文思蓝和四氮唑(TTC)染色评估梗死面积^[1,6]

心梗术后24 h，实验鼠以异氟烷吸入麻醉后仰卧位固定，彻底暴露胸腔，将10g/L的伊文思蓝经心尖部注入心腔，完毕后迅速取出心脏，反复用预冷的0.9%氯化钠溶液进行冲洗并剪除残留包膜及血管，用滤纸吸干，肉眼观察心梗部位，并拍照记录。

保留全心室称重，记为M1 (mg)。全心室心脏标本置于–20 ℃冷冻约30 min后，在结扎线水平下将心脏切成厚度为1 mm左右的薄片5-6片，浸入2%TTC磷酸缓冲液中，37℃孵育15min。用4％的甲醛固定24h , 以增强染色颜色对比，对切片进行扫描拍照。正常心肌染成蓝色，缺血心肌染成砖红色，梗死心肌不着色。剪下白色梗死区域用滤纸吸干后称重，记为 M2 (mg)，梗死区大小计算以百分比表示，

梗死大小(%)= (M2 /M1)×100%。

四氮唑(TTC)染色

伊文思蓝+四氮唑(TTC)染色

(2)Masson三色法^[7]

心梗术后24 h，实验鼠以异氟烷吸入麻醉后仰卧位固定，彻底暴露实验鼠胸腔，剪破右心耳，立即用预冷的PBS进行腹主动脉灌注，灌注完毕后迅速取出心脏，反复用预冷的0.9%氯化钠溶液进行冲洗并剪除残留包膜及血管，用滤纸吸干，置于-20 ℃冰箱速冻15分钟，沿心脏长轴结扎点以下2mm连续切5-6片厚度为1mm的切片，4 %甲醛固定24h后进行masson染色。用自动显微照相系统及微机图像分析系统测定瘢痕弧长以及心内膜和心外膜周长。

心肌梗死面积=瘢痕弧长/[(外周长+内周长)/2]×100%

参考文献

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[2]刘建,范慧敏,汪进益,张治国,曹浩,兰琴,史乾,唐光亮,刘中民.小鼠心梗模型的建立与无创评价[J].中国实验动物学报,2010,18(03):196-198+282.

[3]KUMAR M,KASALA E R,BODDULURU L N,et al.Animal models of myocardial

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[4]TANG Y P,LIU Y,FAN Y J,et al.To develop a novel animal model of myocardial

infarction:a research imperative[J].Anim Models Exp Med,2018,1(1):36-39.

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[7]梁丽玲,杨庭树,李萍,冯斌,韩宝石.同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死[J].中国组织工程研究,2014,18(37):5983-5987.