细胞毒性之CCK8实验

栏目:公司动态 发布时间:2021-07-01 作者: LJ 来源: 原创
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细胞毒性是指由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。

细胞毒性是指由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件,不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。

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CCK-8实验原理:

CCK-8 试剂中含有 WST8 ,它在电子载体 1- 甲氧基 -5- 甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物,生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在 450nm 波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。

 

优点

灵敏度高,数据可靠,重复性好,操作简便,省时省力,毒性小

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实验流程:

1、取对数生长期细胞接种至96孔板中,每孔加入细胞悬液100ul20005000个细胞

2、待细胞贴壁后,换入100ul含不同浓度待测样品的完全培养基

3、根据实验要求,待药物作用24h48h72h后加入10ulCCK8溶液,继续培养14h

4.、取出96孔板,放置酶标仪450 nm处检测吸光。

 

实验孔设置:

1、空白组(绿色):培养基

2、对照组(粉色):培养基+细胞+PBS

3、给药组(红色):培养基+细胞+待测样品

4、白色孔加入100ulPBS或培养基,以缓解蒸发

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注意事项:

1.细胞悬液加入96孔板前,应充分混匀,以免每孔加入细胞量不相等。

296 孔板周围一圈液体容易蒸发,应当加入等量的PBS 或培养基,以缓解蒸发。

3、CCK-8 的培养时间一般为14 h,重复实验必须保证相同培养时间。

4、CCK-8试剂颜色与培养基颜色几乎相同,必须集中注意力加入,以免漏加。

5、酶标仪检测吸光度时,震荡时间不能少于15 S,以免孔内试剂颜色不匀。